明確診斷口腔念珠菌病,除依靠病史和臨床表現(xiàn)外,還需要實(shí)驗(yàn)室檢查證實(shí)損害組織中存在病原菌。念珠菌實(shí)驗(yàn)室檢測方法包括涂片法、分離培養(yǎng)、組織病理學(xué)檢查、免疫學(xué)和基因診斷等。一般來說,臨床上常用的方法是前三種。
1.涂片法
只能發(fā)現(xiàn)真菌而不能確定菌種,對于口腔黏膜干燥的患者陽性率也較低。
?。?)直接涂片:取口腔黏膜區(qū)假膜、脫落上皮等標(biāo)本,涂一薄層于載玻片上,滴人10%KOH溶液,微加熱以溶解角質(zhì)。光鏡觀察,可見折光性強(qiáng)的芽生孢子和假菌絲,從而在數(shù)分鐘內(nèi)提供念珠菌感染的證據(jù)。
?。?)革蘭染色:用棉簽或竹片刮取損害組織后趁濕潤時(shí)固定,常規(guī)革三染色呈陽性。
?。?)PAS染色:標(biāo)本干燥后用PAS染色,芽胞呈紅色,假菌絲較藍(lán),較便于觀察。
2.培養(yǎng)法
將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基,經(jīng)3~4日后,形成乳白色圓形突起的菌落。若接種在玉米瓊脂培養(yǎng)基上,則菌落發(fā)育更旺盛,中心隆起。鏡檢若查見厚壁孢子,可確診為白色念珠菌。
(1)棉拭子法:用棉拭子在病損區(qū)取材。
(2)唾液培養(yǎng)法:收集非刺激性唾液l~2ml接種。
(3)含漱液濃縮法:取1ml滅菌磷酸鹽緩沖液充分含漱l分鐘,離心后棄上清,取1ml接種。
?。?)紙片法:應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基與化學(xué)指示劑吸附于混合纖維素酯微孔濾膜印制的圓片,取刮片標(biāo)本接種其上,37℃培養(yǎng)24小時(shí),可出現(xiàn)棕黑色菌落。
3.免疫法
用間接免疫熒光法測定血清和非刺激性混合唾液的抗念珠菌熒光抗體。因存在較強(qiáng)的免疫交叉反應(yīng)性,故假陽性率(誤檢率)較高。
4.活檢法
對于慢性或肥厚性損害可進(jìn)行活檢,將組織切片用PAS染色,鏡下可見增生的口腔黏膜上皮細(xì)胞間有芽生孢子和菌絲。
5.基因診斷
近年來,分子水平的研究使得對念珠菌的認(rèn)識突破表型鑒定的局限,應(yīng)用基因分型方法對念珠菌進(jìn)行種間鑒別和種內(nèi)分型,為臨床診斷和流行病學(xué)研究提供了更能反映物種本質(zhì)的工具。