無菌操作法系指整個(gè)生產(chǎn)過程控制在無菌條件下進(jìn)行的一種技術(shù)操作。它不是一個(gè)滅菌的過程，只能保持原有的無菌度。本法適用于某些藥品加熱滅菌后，發(fā)生變質(zhì)、變色或降低含量，如注射用粉針、生物制劑、抗生素等。無菌操作所用的一切器具、材料以及環(huán)境，均須用前述適宜的滅菌方法滅菌。

　　無菌操作室的設(shè)計(jì)及層流潔凈室的要求見第三節(jié)。

　　（一）無菌操作室的滅菌

　　無菌操作室的空氣滅菌，可應(yīng)用室內(nèi)空氣滅菌劑如甲醛、丙二醇等蒸汽。藥廠無菌操作室的滅菌，一般用甲醛溶液直接加熱的方法。即每1m3的空間用甲醛溶液30ml，用特制的氣體發(fā)生器輸入。室溫應(yīng)保持在24~40℃以上，以免室溫過低甲醛蒸汽聚合而附著于表面，濕度保持在60%以上，密閉熏蒸不少于8小時(shí)，然后開啟總出風(fēng)口排風(fēng)并通入無菌空氣約2小時(shí)，直至室內(nèi)無臭氣為止。

　　也可用甲醛-高錳酸鉀法，即每1m3的空間用甲醛溶液約20ml與高錳酸鉀10g及溫水20ml進(jìn)行熏蒸滅菌。

　　現(xiàn)也采用臭氧進(jìn)行滅菌，臭氧由專門的臭氧發(fā)生器產(chǎn)生。“德瑞”牌臭氧發(fā)生器由主機(jī)和控制柜兩部分組成，安裝在清潔、干燥、通風(fēng)良好的環(huán)境內(nèi)，周圍環(huán)境濕度最好控制在85%以下。主機(jī)一般安裝于空氣凈化空調(diào)機(jī)組中的過濾后端或風(fēng)道中，以凈化空調(diào)管道中的循環(huán)風(fēng)作為載體，發(fā)生的臭氧利用空氣凈化通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)或回風(fēng)管道的循環(huán)風(fēng)帶出，從而達(dá)到消毒、滅菌效果。

　　除上述方法定期進(jìn)行較徹底的滅菌外，還要對(duì)室內(nèi)的空間、用具（桌椅等）、地面、墻壁等用外用滅菌劑（如3%酚溶液等）噴灑或擦拭。其它用具盡量用熱壓滅菌法或干熱滅菌法滅菌。每天工作前開啟紫外燈1小時(shí)，中途休息時(shí)也要開0.5-1小時(shí)。

　?。ǘo菌操作

　　操作人員進(jìn)入操作室之前應(yīng)洗凈手、臉、腕，換上已滅菌的工作服和專用鞋、帽、口罩等，勿使頭發(fā)、內(nèi)衣等露出，剪去指甲，雙手按規(guī)定方法洗凈并消毒。所用容器、器具應(yīng)用熱壓滅菌法或干熱空氣滅菌法滅菌，如安瓿等玻璃制品應(yīng)在250℃/30min或150-180℃/2-3h干熱滅菌，橡皮塞用121℃/1h熱壓滅菌。室內(nèi)操作人員不宜過多，盡量減少人員流動(dòng)。用無菌操作法制備的注射劑，大多要加抑菌劑。

　　制備少量無菌制劑時(shí)，可用無菌操作柜。無菌操作柜分小型（又稱單人）與聯(lián)合柜兩種，式樣有單面式與雙面式兩種，可用木制，四周配以玻璃制成。前面操作處裝木板，板上挖二圓孔，孔內(nèi)密接乳膠手套或袖套，供伸入雙手在柜內(nèi)操作。藥品及用具等由側(cè)門送入柜后關(guān)閉，柜的中央上方裝紫外線燈一只，并用外用滅菌劑噴霧滅菌。聯(lián)合無菌操作柜是由幾個(gè)小型操作柜聯(lián)合制成，以使原料的精制、傳遞、分裝及成品暫時(shí)存放等工作全部在柜內(nèi)進(jìn)行。操作時(shí)可完全與外界空氣隔絕。

　　（三）無菌檢查

　　藥品經(jīng)無菌操作法處理后，需經(jīng)無菌檢查法檢驗(yàn)證實(shí)已無活的微生物存在后才能使用。法定的無菌檢查法有直接接種法和薄膜濾過法，具體操作方法詳見《中國藥典》（2000年版）附錄。

　　薄膜過濾法用于無菌檢查的突出優(yōu)點(diǎn)，在于可濾過較大量的檢品和可濾除抑菌性物質(zhì)，濾過后的薄膜，即可直接接種于培養(yǎng)基中，或直接用顯微鏡觀察，本法具有靈敏度高、不易產(chǎn)生假陰性結(jié)果、減少檢測次數(shù)、節(jié)省培養(yǎng)基及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。

　　無菌檢查的全部過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物的污染，因此無菌檢查多在層流潔凈工作臺(tái)中進(jìn)行。