無菌操作法系指整個生產過程控制在無菌條件下進行的一種技術操作。它不是一個滅菌的過程，只能保持原有的無菌度。本法適用于某些藥品加熱滅菌后，發(fā)生變質、變色或降低含量，如注射用粉針、生物制劑、抗生素等。無菌操作所用的一切器具、材料以及環(huán)境，均須用前述適宜的滅菌方法滅菌。

　　無菌操作室的設計及層流潔凈室的要求見第三節(jié)。

　?。ㄒ唬o菌操作室的滅菌

　　無菌操作室的空氣滅菌，可應用室內空氣滅菌劑如甲醛、丙二醇等蒸汽。藥廠無菌操作室的滅菌，一般用甲醛溶液直接加熱的方法。即每1m3的空間用甲醛溶液30ml，用特制的氣體發(fā)生器輸入。室溫應保持在24~40℃以上，以免室溫過低甲醛蒸汽聚合而附著于表面，濕度保持在60%以上，密閉熏蒸不少于8小時，然后開啟總出風口排風并通入無菌空氣約2小時，直至室內無臭氣為止。

　　也可用甲醛-高錳酸鉀法，即每1m3的空間用甲醛溶液約20ml與高錳酸鉀10g及溫水20ml進行熏蒸滅菌。

　　現也采用臭氧進行滅菌，臭氧由專門的臭氧發(fā)生器產生。“德瑞”牌臭氧發(fā)生器由主機和控制柜兩部分組成，安裝在清潔、干燥、通風良好的環(huán)境內，周圍環(huán)境濕度最好控制在85%以下。主機一般安裝于空氣凈化空調機組中的過濾后端或風道中，以凈化空調管道中的循環(huán)風作為載體，發(fā)生的臭氧利用空氣凈化通風系統(tǒng)送風或回風管道的循環(huán)風帶出，從而達到消毒、滅菌效果。

　　除上述方法定期進行較徹底的滅菌外，還要對室內的空間、用具（桌椅等）、地面、墻壁等用外用滅菌劑（如3%酚溶液等）噴灑或擦拭。其它用具盡量用熱壓滅菌法或干熱滅菌法滅菌。每天工作前開啟紫外燈1小時，中途休息時也要開0.5-1小時。

　?。ǘo菌操作

　　操作人員進入操作室之前應洗凈手、臉、腕，換上已滅菌的工作服和專用鞋、帽、口罩等，勿使頭發(fā)、內衣等露出，剪去指甲，雙手按規(guī)定方法洗凈并消毒。所用容器、器具應用熱壓滅菌法或干熱空氣滅菌法滅菌，如安瓿等玻璃制品應在250℃/30min或150-180℃/2-3h干熱滅菌，橡皮塞用121℃/1h熱壓滅菌。室內操作人員不宜過多，盡量減少人員流動。用無菌操作法制備的注射劑，大多要加抑菌劑。

　　制備少量無菌制劑時，可用無菌操作柜。無菌操作柜分小型（又稱單人）與聯合柜兩種，式樣有單面式與雙面式兩種，可用木制，四周配以玻璃制成。前面操作處裝木板，板上挖二圓孔，孔內密接乳膠手套或袖套，供伸入雙手在柜內操作。藥品及用具等由側門送入柜后關閉，柜的中央上方裝紫外線燈一只，并用外用滅菌劑噴霧滅菌。聯合無菌操作柜是由幾個小型操作柜聯合制成，以使原料的精制、傳遞、分裝及成品暫時存放等工作全部在柜內進行。操作時可完全與外界空氣隔絕。

　?。ㄈo菌檢查

　　藥品經無菌操作法處理后，需經無菌檢查法檢驗證實已無活的微生物存在后才能使用。法定的無菌檢查法有直接接種法和薄膜濾過法，具體操作方法詳見《中國藥典》（2000年版）附錄。

　　薄膜過濾法用于無菌檢查的突出優(yōu)點，在于可濾過較大量的檢品和可濾除抑菌性物質，濾過后的薄膜，即可直接接種于培養(yǎng)基中，或直接用顯微鏡觀察，本法具有靈敏度高、不易產生假陰性結果、減少檢測次數、節(jié)省培養(yǎng)基及操作簡便等優(yōu)點。

　　無菌檢查的全部過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物的污染，因此無菌檢查多在層流潔凈工作臺中進行。