本品系用傷寒菌培育后取菌苔制成懸液，加甲醛殺菌，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成每ml含菌3億制成。用于預(yù)防傷寒。

　　1菌種

　　1.1菌種來(lái)源

　　制造傷寒菌苗用的菌種及檢定菌種用的診斷血清，應(yīng)由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。

　　1.2菌種檢定

　　定菌種可用pH7.2～7.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。

　　1.2.1培養(yǎng)特性

　　制造菌苗的菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。

　　1.2.2血清凝集試驗(yàn)

　　用37℃培育18～20小時(shí)的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成含菌6億/ml，與傷寒菌診斷血清作定量凝集試驗(yàn)，充分混合后放37℃過(guò)夜，以肉眼見(jiàn)到凝集（+）之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)之效價(jià)。凝集價(jià)不應(yīng)低于血清原效價(jià)之半。并用傷寒Vi及O血清做凝集試驗(yàn)，應(yīng)與Vi血清有凝集，與O血清不凝集，或僅有較低凝集。

　　1.2.3毒力試驗(yàn)

　　用37℃培育12～16小時(shí)的瓊脂培養(yǎng)物以生理鹽水稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml等濃度的菌液（根據(jù)菌種毒力情況稀釋度可作更改也可增加稀釋度）。每1稀釋度的菌懸液腹腔注射體重14～16g之小白鼠，最少5只，每只0.5ml，觀(guān)察3天。使小白鼠于感染后3天內(nèi)全部死亡的最小劑量為1個(gè)致死量（LD），1LD應(yīng)不超過(guò)1.5億菌。

　　1.2.4毒性試驗(yàn)

　　用37℃培育18～20小時(shí)之瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，56℃加溫1小時(shí)（或其他方法殺菌）。不加防腐劑。殺菌試驗(yàn)合格后稀釋為每ml含菌60、30及15億共3個(gè)濃度，每個(gè)濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重15～18g小白鼠5只，觀(guān)察3天，注射7.5億菌之小白鼠應(yīng)全部生存，注射15億菌之5只小白鼠可有3只死亡。

　　1.2.5免疫力試驗(yàn)

　　按《傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程》1.2.5項(xiàng)進(jìn)行。

　　1.2.6抗原性試驗(yàn)

　　選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗(yàn)所用之菌液靜脈注射3次，每次0.5ml，第1次注射7億菌，第2次14億菌，第3次21億菌，每次間隔7天。末次注射后10～14天采血做定量凝集試驗(yàn)測(cè)定效價(jià)，2/3家兔血清之凝集效價(jià)不低于1∶12800為合格。

　　1.3菌種保存

　　菌種應(yīng)凍干保存，凍干菌種保存于2～8℃

　　菌種凍干后應(yīng)抽取樣品按1.2項(xiàng)進(jìn)行檢查，合格后可使用3年，以后每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性一次，合格者可繼續(xù)使用2年。

　　2菌苗制造

　　制造傷寒菌苗應(yīng)選用2個(gè)菌株。

　　2.1菌種

　　凍干菌種啟開(kāi)后應(yīng)檢查菌形、純度及玻片凝集試驗(yàn)（包括用Vi血清做玻凝集反應(yīng)），合格后即可使用，每啟開(kāi)1支凍干菌種用于生產(chǎn)不應(yīng)超過(guò)6代。

　　2.2制造用培養(yǎng)基

　　用pH7.2～7.4的馬丁瓊脂或肉湯瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。

　　2.3原液制造

　　2.3.1接種

　　可采用涂種，接種后置37℃培育18～24小時(shí)。

　　2.3.2采集

　　采集前應(yīng)逐瓶檢查，有雜菌者廢棄。刮取菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水中。

　　2.3.3純菌試驗(yàn)

　　原液采集后應(yīng)逐瓶取樣接種瓊脂斜面1管，于37℃培育2天，24～26℃1天，如有雜菌生長(zhǎng)應(yīng)廢棄。

　　2.3.4殺菌

　　原液中加入不超過(guò)1.1%±0.1%（ml/ml）的甲醛溶液殺菌。加殺菌劑后的原液應(yīng)放在37℃，不得超過(guò)7天，以后保存于2～8℃。

　　2.3.5無(wú)菌試驗(yàn)

　　純菌試驗(yàn)合格的原液，應(yīng)取樣接種不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及普通瓊脂斜面各1管，放37℃培育5天，如有本菌生長(zhǎng)，可加培量復(fù)試一次；如有雜菌生長(zhǎng)應(yīng)廢棄。

　　2.3.6原液合并

　　無(wú)菌試驗(yàn)合格的原液按不同菌株或不同制造日期分別過(guò)濾合并。合并后應(yīng)加不超過(guò)0.5%（g/ml）苯酚或其他適宜防腐劑，保存于2～8℃。

　　2.4原液檢定

　　2.4.1鏡檢

　　菌形應(yīng)正常，無(wú)雜菌。

　　2.4.2凝集試驗(yàn)

　　原液與相應(yīng)血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，其凝集效價(jià)不應(yīng)低于血清原效價(jià)之半。

　　2.4.3無(wú)菌試驗(yàn)

　　按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

　　2.4.4濃度制定

　　應(yīng)按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門(mén)會(huì)同測(cè)定濃度。

　　2.4.5免疫力試驗(yàn)

　　原液于無(wú)菌試驗(yàn)合格后與質(zhì)量檢定部門(mén)會(huì)同進(jìn)行，抽檢批數(shù)不應(yīng)少于生產(chǎn)批數(shù)的1/5.方法同1.2.5項(xiàng)，唯所用小白鼠每組至少15只，保護(hù)60%免疫小白鼠活存為合格。

　　2.5原液保存

　　原液應(yīng)保存于2～8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀釋時(shí)不得少于4個(gè)月，保存效期自采集之日起為2年半。

　　2.6菌苗稀釋

　　2.6.1原液配合

　　稀釋前應(yīng)先將不同菌株所制之原液按菌數(shù)等量混合，但每個(gè)菌株所加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下允許兩個(gè)菌株之間在40%范圍內(nèi)互有增減。

　　2.6.2菌苗稀釋

　　稀釋菌苗用含0.25%～0.5%（g/ml）苯酚或其他適宜的防腐劑之磷酸鹽緩沖生理鹽水。

　　2.6.3菌苗濃度

　　每ml含傷寒菌3億

　　2.7菌苗分批

　　同組配合的原液用同一批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗為1批。大罐稀釋的應(yīng)按大罐分批，并按分裝機(jī)分為亞批。

　　2.8檢定

　　稀釋后每批應(yīng)逐瓶抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)及測(cè)定防腐劑含量（大罐稀時(shí)除外）。

　　2.9分裝

　　分裝后每亞批應(yīng)抽樣送質(zhì)量檢定部門(mén)進(jìn)行成品檢定。

　　3成品檢定

　　3.1物理化學(xué)檢查

　　菌苗應(yīng)為乳白色懸液，pH值為6.8～7.4，不應(yīng)有搖不散的菌塊及異物。苯酚含量應(yīng)為0.25%～0.5%（g/ml）。

　　3.2菌形及純度

　　染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性桿菌。至少觀(guān)察10個(gè)視野，平均每個(gè)視野內(nèi)不得有10個(gè)以上非典型菌（線(xiàn)狀、粗大或染色可穎桿菌），并不應(yīng)有雜菌。

　　3.3無(wú)菌試驗(yàn)

　　按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

　　3.4安全試驗(yàn)

　　3.4.1毒性試驗(yàn)

　　用體重18～20g之健康小白鼠5只，每只腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗1.5ml，觀(guān)察7日，應(yīng)無(wú)死亡。

　　3.4.2防腐劑試驗(yàn)

　　用體重18～20g之健康小白鼠2只，每只皮下注射菌苗0.5ml，用苯酚作防腐劑的菌苗注射之小白鼠會(huì)發(fā)生戰(zhàn)栗癥狀，但不應(yīng)超過(guò)半小時(shí)，觀(guān)察7日，不得有局部膿腫或死亡。

　　4保存與效期

　　應(yīng)保存于2～8℃。自稀釋之日起效期為1年半。如原液保存超過(guò)1年稀釋?zhuān)瑧?yīng)相應(yīng)縮短效期（自原液采集之日起總效期不得超過(guò)2年半）。