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免疫電泳技術(shù)知識總結(jié)-檢驗主管技師輔導

2015-09-08 13:46 來源:
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免疫電泳技術(shù)是檢驗主管技師考試要涉及的知識點,醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)知識點總結(jié),希望對考生有幫助!

一、對流免疫電泳

對流免疫電泳試驗是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理,敏感的電泳技術(shù)。既可用已知抗原檢測抗體,又可用已知抗體檢測抗原。反應結(jié)果可信度高,適用范圍廣。以本法為基礎改進的技術(shù)有酶標記抗原對流免疫電泳和放射對流免疫電泳自顯影等技術(shù)。二者克服了電泳技術(shù)本身不夠靈敏的弱點。

二、火箭免疫電泳

(1)原理:火箭免疫電泳是將單向免疫擴散和電泳相結(jié)合的技術(shù)??乖陔妶鲎饔孟?,在含有適量抗體的瓊脂糖凝膠中向正極泳動,逐漸形成梯度濃度,在抗原抗體比例適當時形成沉淀,隨著抗原量的減少,沉淀帶越來越窄,形成火箭峰樣沉淀,峰形高低與抗原量呈正相關(guān)醫(yī)`學教育網(wǎng)搜集整理。用已知量標準抗原作對照,繪制標準曲線,根據(jù)檢測樣品沉淀峰的高度可算出待測抗原的含量。

(2)主要用途:

①抗原蛋白定量,如IgA、IgG、IgM和sIgA檢測;

②C3、C4及其裂解產(chǎn)物檢測;

③AFP等檢測。

三、免疫電泳

免疫電泳是將區(qū)帶電泳和免疫擴散結(jié)合起來的一種免疫學分析法。血清標本先經(jīng)區(qū)帶電泳將各種蛋白成分分離開,繼而用各種特異性抗血清進行免疫擴散,根據(jù)M蛋白在免疫電泳中所形成的特殊沉淀弧,觀察其電泳轉(zhuǎn)移位置與抗原特異性,可將M蛋白的免疫球蛋白類型和其輕鏈型加以鑒定。IFP還不能完全進行M蛋白分類時,可用免疫固定電泳做補充鑒定醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。

注意:

①Ag與Ab比例要適當;

②用游離輕鏈分析時,由于其分子量小,擴散快,故每隔10分鐘觀察一次結(jié)果;

③有時M蛋白(IgA或IgM)的四級結(jié)構(gòu)會影響輕鏈抗原決定簇與相應抗體結(jié)合,輕鏈不易檢出,易誤診為重鏈病,因此,在血清中加入2~疏基乙醇(10μl/ml)作還原處理后,再作試驗觀察結(jié)果。

四、免疫固定電泳

免疫固定電泳技術(shù)(IFE)是一種包括瓊脂凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個過程的操作。檢測標本可以是血清、尿液、腦脊液或其它體液。免疫固定電泳技術(shù)(IFE)已在醫(yī)學研究、法醫(yī)學、基因診斷和臨床實驗室操作中得到了廣泛的應用。臨床主要應用如下疾病的診斷和療效觀察:

1、單克隆免疫球蛋白增殖?。菏且詥我豢寺〉臐{細胞過度增高為特征,常常導致某種免疫球蛋白或免疫球蛋白亞單位大量合成而其他正常免疫球蛋白水平下降。免疫化學方法能夠?qū)Ξ惓5鞍锥浚娪痉治瞿軌虼_定這些蛋白質(zhì)的單克隆屬性。

2、本周氏蛋白和游離輕鏈?。罕局苁系鞍资菦]有與免疫球蛋白分子中重鏈結(jié)合的單克隆κ或λ輕鏈。免疫固定電泳來確定本周氏蛋白的存在形式。輕鏈病是指僅產(chǎn)生κ或λ單克隆輕鏈,在尿中稱為本周氏蛋白的疾病,輕鏈病包括10%-15%的單克隆免疫球蛋白病,它多出現(xiàn)在IgG骨髓瘤(60%)和IgA骨髓瘤(16%)病中。

3、重鏈?。菏且悦庖咔虻鞍字劓湶糠执嬖诘膯慰寺〉鞍诪樘卣?。

4、多克隆免疫球蛋白病:主要為γ蛋白區(qū)寬的條帶,多見于炎癥或感染和膠原病。

5、腎臟病變的來源分析:尿免疫蛋白電泳可以很好地協(xié)助臨床判斷腎臟的主要損傷(腎小球和腎小管)及尿蛋白選擇程度的估計,選擇性和非選擇性蛋白尿。指導治療和判斷預后有價值。

五、交叉免疫電泳

用瓊脂糖作支持物,先將抗原經(jīng)電泳展開,然后在同一玻板上澆注含抗體的瓊脂糖凝膠,在后一個凝膠中進行第二次電泳(與第一次電泳方向垂直)。這種方法實際上是在凝膠電泳后進行免疫電擴散。不同抗原形成互相獨立的峰狀免疫沉淀,至最適抗原/抗體比值處停止運動,沉淀峰的高度和面積與抗原量成比例關(guān)系。用此法可進行各種抗原的定量測定。

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