1. 目的：

保證Roche E1010全自動免疫分析儀的正確操作，保證檢驗結果的準確可靠。

2. 適用范圍：

臨床血液實驗室

3. 項目名稱：

血漿肌鈣蛋白T（TNT），血漿肌紅蛋白（MYO），血漿肌酸激酶同工酶（CK-MB）。

4. 項目方法：

電化學發(fā)光法

5.原理：

雙抗體夾心法

5.1 血漿肌鈣蛋白T：人血清中血清/血漿肌鈣蛋白T與其相應抗體（生物素標記和三聯(lián)吡啶釕標記的抗TNT單抗）在反應池中相遇，形成雙抗體復合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個抗體復合物與微粒子結合。當輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結合的抗體等物質被洗去?；瘜W發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學發(fā)光反應，通過測定發(fā)出的光強度，換算出待測標本中抗原的濃度。

5.2 血漿肌紅蛋白：人血清中血清/血漿肌紅蛋白與其相應抗體（生物素標記和三聯(lián)吡啶釕標記的抗肌紅蛋白單抗）在反應池中相遇，形成雙抗體復合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個抗體復合物與微粒子結合。當輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結合的抗體等物質被洗去。化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學發(fā)光反應，通過測定發(fā)出的光強度，換算出待測標本中抗原的濃度。

5.3 血漿肌酸激酶：人血清中血清/血漿肌酸激酶同工酶與其相應抗體（生物素標記和三聯(lián)吡啶釕標記的抗肌酸激酶同工酶單抗）在反應池中相遇，形成雙抗體復合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個抗體復合物與微粒子結合。當輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結合的抗體等物質被洗去?；瘜W發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學發(fā)光反應，通過測定發(fā)出的光強度，換算出待測標本中抗原的濃度。

5.4加入試劑R1（生物素標記的抗TNT/MYO/CK-MB單抗）、試劑R2（三聯(lián)吡啶釕標記的抗TNT/MYO/CK-MB單抗）和樣品，孵育9分鐘→加入M（鏈霉素標記包被的微粒子），孵育9分鐘→測量光強度。

6.試劑：

Roche 公司配套試劑

6.1 規(guī)格R1 10 ml * 1瓶R2 10 ml * 1瓶M 6.5 ml * 1瓶6.2試劑盒組成6.2.1 R1（生物素標記的抗TNT單抗）

生物素標記的抗TNT單抗（大鼠） 1.5 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 6.0防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標記的抗TNT單抗）

三聯(lián)吡啶釕標記的抗TNT單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 6.0防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑6.2.2 R1（生物素標記的抗肌紅蛋白單抗）

生物素標記的抗肌紅蛋白單抗（大鼠） 7.0 mg/L磷酸鹽緩沖液 85 mol/L，pH 6.5疊氮鈉 < 0.1 %防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標記的抗肌紅蛋白單抗）

三聯(lián)吡啶釕標記的抗肌紅蛋白單抗（大鼠） 4.8 mg/L磷酸鹽緩沖液 85 mol/L，pH 6.5疊氮鈉 < 0.1 %防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑6.2.3 R1（生物素標記的抗肌酸激酶同工酶單抗）

生物素標記的抗CK-MB單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 7.0防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標記的抗肌酸激酶同工酶單抗）

三聯(lián)吡啶釕標記的抗CK-MB單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 7.0防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑

6.3試劑準備R1：即用型R2：即用型M：即用型6.4 試劑的保存和穩(wěn)定性：未打開的試劑盒：2 - 8℃豎直放置，可儲存至有效期末。

打開后在E1010上可穩(wěn)定8 w.

7.其它輔助用品：

反應杯、蒸餾水。

8.分析前處理：

8.1 病人準備：要求患者在安靜狀態(tài)下；晨起的精神、體力、情緒等因素的影響較小，是標本采集的最佳時間；抽取肘部靜脈血。

8.2 標本種類：EDTA或枸櫞酸鈉抗凝血漿。采血后應盡快分離血漿。

8.3 標本穩(wěn)定性： 注射器、試管要干燥潔凈，以避免溶血。

8.4 標本稀釋：無需稀釋。

8.5 標本容器：一般用真空采血管中的EDTA-K2抗凝管（淡蘭色頭蓋）。

8.6 標本最小用量：2 ml. 8.7 標本運送：標本采集于真空采血管后應盡快送實驗室分析，物流系統(tǒng)可加快標本傳遞速度。2 - 8℃可穩(wěn)定1天，-20℃可穩(wěn)定12個月。若標本不能及時轉運到實驗室或標本將送到上級部門或檢測中心進行分析，應將真空采血管內(nèi)的標本置冰瓶或冷藏箱內(nèi)運輸，運送過程中應避免劇烈震蕩。

9.儀器：

9.1 儀器名稱和品牌：Roche E1010全自動免疫分析儀9.2 保養(yǎng)：9.3 定標：當試劑批號改變時也必須進行定標，或根據(jù)質控值進行定標。

9.3.1 操作：同標本測定。

9.3.2 分析：定標值應在設定范圍內(nèi)。若定標不通過，則應分析為試劑原因或定標液問題，再行處理。

9.3.3 記錄：定標記錄應保存在定標記錄存放盒，更換試劑應在《試劑更換登記本》上登記。

10.質控：

10.1 質控品：

10.2 每天應做2個水平的質控品，分別為低值和高值，下列條件之一者必須加做質控品的檢測：

10.2.1 更換不同批號的試劑時。

10.2.2 重新定標后。

10.3 操作：同標本測定。

10.4 分析：質控結果允許范圍內(nèi)，失控應在《失控分析記錄本》上進行失控分析。

10.5 記錄：質控結果應記錄在《血液室室內(nèi)質控原始記錄本》上。

11.操作步驟：

11.1 將試劑放入試劑倉，按SCAN鍵，儀器對試劑進行掃描。

11.2進入INVENTROY清單，檢查試劑、孵育杯、蒸餾水量、廢液量。同時顯示試劑位置、名稱及可測試數(shù)。

11.3進入ORDER菜單。選擇NEW SAMPLE，輸入標本號、位置號、測試項目。

11.4在相應位置放入標本，按START鍵……

11.5測試結束，結果打印或自動傳輸?shù)街形碾娔X。

12.參考值范圍：

TNT 0.000 - 0.030 ng/mL MYO ： 男性 28-72 ng/mL女性 25-58 ng/mL CK-MB 0.10 - 4.94 ng/mL

13.報告結果：

13.1 標本檢測結果自動傳入中文電腦，數(shù)據(jù)經(jīng)操作者初次審核，初次審核結果后打印報告單，經(jīng)小組負責人再次審核后發(fā)出。

13.2 報告樣式：參見參考值范圍。

14 臨床意義：

14.1 血漿肌鈣蛋白：心肌損傷的確定性指標， 包括無癥狀的AMI或有缺血損傷卻無明顯癥狀者。發(fā)病后3～6h升高，10～24h高峰，10～15d恢復。靈敏度50～59%，特異性96%以上。升高的程度與預后有關。心臟手術后可使cTnT升高，不能區(qū)分損傷是否由手術創(chuàng)傷所致。

14.2 血漿肌紅蛋白：小分子含氧結合蛋白。存在于心肌和骨骼肌中。AMI發(fā)病后0.5～2h升高，5～12h高峰， 18～30h恢復正常。心肌損傷最早期指標。升高的幅度和持續(xù)時間與梗塞面積、心梗程度密切相關。Myo陰性（6～10h）可排除AMI診斷。有助于判斷再梗塞或梗塞擴展。

14.3 CK-MB：CK-MB是早期診斷AMI靈敏指標。發(fā)病后3h升高，10～30h高峰， 48～72h恢復。敏感度17～62%，特異性92～100%.心肌炎、多發(fā)性肌炎、進行性肌營養(yǎng)不良、重癥肌無力均可升高。

15.實驗性能參數(shù)：

15.1 檢測范圍：TNT： 0.010 – 25.00 ng/mL MYO： 21 – 30000 ng/mL CK-MB： 0.100 – 500.0 ng/mL 15.2 干擾因素：15.2.1 TNT： 黃疸：結合和游離膽紅素濃度 < 462 μmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度< 1g/L時沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 15 g/L沒有明顯干擾。樣本有肉眼可見的溶血時不能分析……

15.2.2 MYO： 黃疸：結合和游離膽紅素濃度 < 1.11 mmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度約14 g/L時沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 22 g/L沒有明顯干擾。

15.2.3 CK-MB： 黃疸：結合和游離膽紅素濃度 < 0.58 mmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度< 15 g/L時沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 15 g/L沒有明顯干擾。

15.3 精密度與敏感性：TNT濃度低于400 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。

肌紅蛋白濃度低于30，000 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。

CK-MB濃度低于5000 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。