酶活力測定有哪些影響因素:
1.反應(yīng)速度
大多數(shù)酶促反應(yīng)是可逆反應(yīng),其速度既受底物濃度的影響,也受產(chǎn)物生成量的影響。當(dāng)?shù)孜餄舛容^高時(shí),在反應(yīng)的初期,其濃度變化甚微,產(chǎn)物生成量也很少,此時(shí)反應(yīng)速度可看作是恒定的。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)中所指速度就是反應(yīng)的初速度。
2.底物濃度
米氏方程ν=νmax【S】/Km+【S】是反映酶促反應(yīng)速度與底物濃度關(guān)系的方程式,其中Km稱米氏常數(shù)。
Km值是酶的特征常數(shù)之一,只與酶的性質(zhì)有關(guān),而與酶濃度無關(guān)。不同的酶,Km值不同。同一個(gè)酶有幾種底物時(shí),則對(duì)每一種底物各有一特定的Km值,其中Km值最小的底物一般稱為該酶的最適底物或天然底物。
綜上所述,根據(jù)酶的特性及定量原理,測定酶活力時(shí),必須注意以下幾點(diǎn)醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)`搜集整理:
(1)酶促反應(yīng)過程中,只有最初一段時(shí)間內(nèi)反應(yīng)速度與酶濃度成正比,隨著反應(yīng)時(shí)間的延長,反應(yīng)速度即逐漸降低。
(2)要規(guī)定一定的反應(yīng)條件,如時(shí)間、溫度、pH等,并在酶測定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定,如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃,pH應(yīng)恒定。
(3)配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大,底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中,以防止底物被分解。
(4)標(biāo)本要新鮮,由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低,標(biāo)本如無法及時(shí)測定,應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時(shí),應(yīng)考慮到抗凝劑對(duì)酶反應(yīng)的影響。有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高,為此在采血、分離血清時(shí),應(yīng)注意防止溶血和白細(xì)胞的破裂。
(5)在測定過程中,所用儀器應(yīng)絕對(duì)清潔,不應(yīng)含有酶的抑制物,如酸、堿、蛋白沉淀劑等。