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自然殺傷細(xì)胞的檢測

2014-02-18 15:59 來源:
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(一)形態(tài)法

檢測原則是將效應(yīng)細(xì)胞與靶按一定比例混合共育,繼而臺盼藍(lán)或伊紅Y等活細(xì)胞拒染的染料處理,然后分別計(jì)數(shù)著染的死細(xì)胞和不著染的活細(xì)胞,由此推算NK的細(xì)胞的殺傷活性。本法簡便,易于掌握,但判斷死細(xì)胞與活細(xì)胞不免帶有檢測者的主觀因素,也無法計(jì)數(shù)輕微損傷的細(xì)胞。

(二)酶釋法

檢測原則是將一定比例的效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞共溫一段時(shí)間后,離心沉淀,取上清液檢測靶細(xì)胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷酸酶含量。本法經(jīng)濟(jì)、快速簡便,但可定量。缺點(diǎn)是靶細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶含量低或因某些未死亡細(xì)胞能自行釋放,從而影響法靈敏度和特異性。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理此外乳酸脫氫酶分子較大,僅當(dāng)靶細(xì)胞膜完全被破壞時(shí)才釋放,故不能較早地反映效應(yīng)的功能。

(三)熒光法

檢測原則是用熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞,經(jīng)與效應(yīng)細(xì)胞共溫后,離心法上清,用熒光計(jì)檢測剩余的活靶細(xì)胞的熒光,缺點(diǎn)是活細(xì)胞釋放的熒光常被效應(yīng)細(xì)胞和培養(yǎng)液等所粹滅。另外,熒光分析法常遇細(xì)胞自然釋放率高,熒光本底強(qiáng),影響靈敏度。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理為克服上述障礙,用時(shí)間分辨熒光免疫分析,將靶細(xì)胞用鑭系元素銪(Eu3+)的螯合物標(biāo)記,按同法與效應(yīng)細(xì)胞共溫后,用時(shí)間分辨熒光計(jì)檢測熒光,可除去非特異性熒光本底。本法實(shí)驗(yàn)時(shí)間短,效靶細(xì)胞僅需共溫2h,檢測速度快,特異性強(qiáng)。

檢測原則是將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞按一定比例混合溫育后,直接檢測靶細(xì)胞。分有靶細(xì)胞漿釋放法和胞核釋放法。

1.胞漿釋放法常用51Cr釋放法。51Cr透過細(xì)胞膜與胞漿中小分子蛋白質(zhì)結(jié)合,一旦細(xì)胞膜遭破壞,同位素隨蛋白質(zhì)外溢,并且不會被完整的細(xì)胞再度攝入。本法操作簡便快速能定量,缺點(diǎn)是自然釋放率高,所需靶細(xì)胞數(shù)量多,51Cr半衰期短。近年有用111In(銦)檢測NK細(xì)胞活性,優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)記率高,用量微,以γ射線放射,可釋放90%的自身能量,比51Cr高10倍,自然釋放率低,僅為51Cr的一半。

2.胞核釋放法常用3H-TdR或125IudR作為DNA合成的前體物,可被攝入靶細(xì)胞核內(nèi)。當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞共溫后,用胰酸和DNA酶處理可使遭破壞的胞核內(nèi)容物釋放。本法自然釋放率比51Cr低,半衰期較長,方法的敏感性高,故被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室所采用。

(五)化學(xué)發(fā)光法

檢測原則是當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸時(shí),效應(yīng)細(xì)胞呼吸爆發(fā),生成極不穩(wěn)定的O2-和OH-等,放出光子,在發(fā)光劑存在的條件下,可被電倍增管接受和計(jì)數(shù),發(fā)光量與NK細(xì)胞殺傷能力相關(guān)。

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