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弓形蟲(chóng)病檢查

弓形蟲(chóng)病檢查:

(一)病原檢查

1.直接鏡檢:取患者血液、骨髓或腦脊液、胸腹水、痰液、支氣管肺泡灌洗液、眼房水、羊水等作涂片,或淋巴結(jié)、肌肉、肝、胎盤(pán)等活組織切片,作瑞氏或姬氏染色鏡檢可找到滋養(yǎng)體或包囊,但陽(yáng)性率不高。亦可作直接免疫熒光法檢查組織內(nèi)弓形蟲(chóng)。

2.動(dòng)物接種或組織培養(yǎng):取待檢體液或組織懸液,接種小白鼠腹腔內(nèi),可產(chǎn)生感染并找到病原體,第一代接種陰性時(shí),應(yīng)盲目傳代3次。或作組織(猴腎或豬腎細(xì)胞)培養(yǎng)以分離、鑒定弓形蟲(chóng)。

3.DNA雜交技術(shù):國(guó)內(nèi)學(xué)者首次應(yīng)用32P標(biāo)記含弓形蟲(chóng)特異DNA序列的探針,與患者外周血內(nèi)細(xì)胞或組織DNA進(jìn)行分子雜交,顯示特異性雜交條帶或斑點(diǎn)為陽(yáng)性反應(yīng)。特異性和敏感性均高。此外,國(guó)內(nèi)亦已建立多聚酶鏈反應(yīng)診斷弓形蟲(chóng)病,并與探針雜交、動(dòng)物接種和免疫學(xué)檢查方法相比較,顯示春具高度特異、敏感和快速等優(yōu)點(diǎn)。

(二)免疫學(xué)檢查

1.檢測(cè)抗體:所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞質(zhì)抗原)和胞膜抗原。前者的抗體出現(xiàn)較早(用染色試驗(yàn)、間接免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè))、而后者的抗體出現(xiàn)較晚(用間接血凝試驗(yàn)等檢測(cè))。同時(shí)采用多種方法檢測(cè)可起互補(bǔ)作用而提高檢出率。由于弓形蟲(chóng)在人體細(xì)胞內(nèi)可長(zhǎng)期存在,故檢測(cè)抗體一般難以區(qū)別現(xiàn)癥感染或以往感染,可根據(jù)抗體滴度的高低以及其動(dòng)力學(xué)變化加以判斷。常用的檢測(cè)方法有:

⑴染色試驗(yàn)(Sabin-FeldmanDT):檢測(cè)IgG抗體。感染后1~2周出現(xiàn)陽(yáng)性,3~5周抗體效價(jià)達(dá)高峰,以后逐漸下降,可維持多年??贵w效價(jià)1∶陽(yáng)性提示為隱性感染;1∶256為活動(dòng)性感染1∶1024為急性感染。其缺點(diǎn)為需要活蟲(chóng)進(jìn)行操作。

⑵間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT):檢測(cè)IgM和IgG抗體。具靈敏、特異、快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),與DT基本一致。但如有類(lèi)風(fēng)濕因子、抗核抗體陽(yáng)性時(shí),可引起假陽(yáng)性反應(yīng)。血清抗體效價(jià)1∶64為既往感染,余同DT.

⑶間接血凝試驗(yàn)(IHA):試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。與DT結(jié)果符合率高。但一般在病后一個(gè)月左右出現(xiàn)陽(yáng)性。結(jié)果判斷同IFAT.重復(fù)性差和致敏紅細(xì)胞不穩(wěn)定與其缺點(diǎn)。

⑷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):可檢查IgM與IgG抗體。并有靈每度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。也可用于抗原鑒定。近年來(lái)在ELISA的基礎(chǔ)上又創(chuàng)建、衍生了多種新新的測(cè)定方法,如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記SPA取代酶標(biāo)第二抗體進(jìn)行ELISA檢測(cè)(PPA-ELISA);親和素-生物素(ABG)ELISA;凝膠擴(kuò)散(DIG)-ELISA;斑點(diǎn)(DDT)-ELISA以及單克隆抗體(McAb)-ELISA等更靈敏、更特異的方法。

⑸放射免疫試驗(yàn)(RIA):具有高度敏感性和特異性。

2.檢測(cè)抗原:用免疫學(xué)方法檢測(cè)宿主細(xì)胞內(nèi)的病原(速殖子或包囊)、在血清及體液中的代謝或裂解產(chǎn)物(循環(huán)抗原)。是早期診斷和確診的可靠方法。國(guó)內(nèi)外學(xué)者建立了McAb-ELISA以及McAb與多抗的夾心型ELISA法檢測(cè)急性患者血清循環(huán)抗原,其敏感度為能檢出血清中0.4μg/ml的抗原。

(三)皮內(nèi)試驗(yàn)

以受染小白鼠腹腔液或雞胚液作抗原。常出現(xiàn)延遲性、結(jié)核菌素反應(yīng)。可用作流行病學(xué)調(diào)查。目前應(yīng)用不多。

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