摘 要：目的構(gòu)建用于篩選人CD4結(jié)合蛋白的酵母雙雜交餌載體，并對(duì)其功能進(jìn)行鑒定。

　　方法 RT-PCR擴(kuò)增編碼CD4的cDNA.構(gòu)建雙雜交餌載體pAS2-1-CD4，并轉(zhuǎn)化入宿主酵母菌Y190中。通過測定報(bào)告基因——β-半乳糖苷酶的活性，判斷餌載體自激活報(bào)告基因能力。將CD4的已知HIV配體gp120構(gòu)建入獵物載體pACT2，轉(zhuǎn)入重組菌Y190/pAS2-1-CD4.檢測其報(bào)告基因活性，鑒定pAS2-1-CD4是否具有篩選CD4結(jié)合蛋白的能力。

　　結(jié)果 DNA序列測定證實(shí)，獲得了編碼CD4蛋白的cDNA序列。β-半乳糖苷酶活性測定表明，pAS2-1-CD4單獨(dú)無自激活能力，與獵物載體pACT2-gp120能夠發(fā)生相互作用，激活報(bào)告基因表達(dá)。

　　結(jié)論 構(gòu)建了酵母雙雜交餌載體pAS2-1-CD4，為篩選CD4結(jié)合蛋白（尤其是篩選病毒編碼的CD4配體），提供了技術(shù)平臺(tái)。