用于免疫組織化學的固定劑種類較多,性能各異,在固定半穩(wěn)定性抗原時,尤其重視固定劑的選擇,介紹如下。
(1)醛類固定劑:雙功能交聯(lián)劑,其作用是使組織之間相互交聯(lián),保存抗原于原位,其特點是對組織穿透性強,收縮性小。有人認為它對IgM、IgA、J鏈、K鏈和λ鏈的標記效果良好,背景清晰,是常用的固定劑。
(2)非醛類固定劑:Pe等人比較幾種非醛類雙功能試劑指出,碳化二亞胺、二甲基乙酰胺、二甲基辛酰亞胺、和對苯醌等均適用于多肽類激素的組織固定,單獨使用時,邊緣固定效應(yīng)重,但與戊二醛或多聚甲醛混合使用,效果明顯改善。
(3)丙酮及醇類固定劑:系最初免疫細胞化學染色的固定劑,其作用是沉淀蛋白質(zhì)和糖,對組織穿透性很強,保存抗原的免疫活性較好。但醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,解決的辦法是和其它試劑混合使用,如加冰醋酸、乙醚、氯仿、甲醛等。
以上介紹了免疫組織化學中常用的固定液,用于免疫組化的固定劑種類很多,不同的抗原和標本需經(jīng)過反復試驗,選用最佳固定液。選擇最佳固定液標準是:①最好地保持細胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。②最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化技術(shù)中是禁用的。實際經(jīng)驗告訴我們,中性緩沖福爾馬林(或多聚甲醛)是適應(yīng)性較醫(yī)學教`育網(wǎng)搜集整理廣泛的固定液,但固定時間不宜過長。必要時,可作多種固定液對比,從而選出理想的標準固定液。
固定組織時應(yīng)注意:①應(yīng)力求保持組織新鮮,勿使其干燥,盡快固定處理。②組織塊不易過大過厚,必須小于2cm×1.5cm×0.3cm,尤其是組織塊厚度必須控制在0.3cm以內(nèi)。③固定液必須有足夠的量,在體積上一般大于組織20倍以上,否則組織中心固定不良影響效果。④組織固定后應(yīng)充分水洗,去除固定液造成的人為假象。
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