醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師：《答疑周刊》2015年08期

【問(wèn)題】細(xì)胞內(nèi)膽固醇少了LDL受體會(huì)增加，為什么是負(fù)反饋調(diào)節(jié)？？

LDL或其他含ApoB100的脂蛋白如VLDL與LDL受體結(jié)合后，內(nèi)吞入細(xì)胞，經(jīng)溶酶體酶作用，膽固醇酯水解成游離膽固醇。若胞內(nèi)膽固醇濃度升高，可通過(guò)：

①抑制HMGCoA還原酶，減少自身的膽固醇合成；

②抑制LDL-R基因的表達(dá)，減少LDL-R的合成，從而減少LDL的攝??；

③激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂?；鵆oA膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（ACAT），使游離膽固醇在胞質(zhì)內(nèi)酯化成膽固醇酯貯存，從而控制細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量，使其處于正常動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。因此為負(fù)反饋調(diào)節(jié)。

2免疫印跡法和斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)區(qū)別

免疫印跡法(Westernblotting)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種最常用的方法，如組織抗原的定性定量檢測(cè)、多肽分子的質(zhì)量測(cè)定及病毒的抗體或抗原檢測(cè)等。免疫印跡法(immunobiottingtest,IBT)亦稱(chēng)酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzymelinkedimmunoelectrotransferblot,EITB),因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法Southernblot相類(lèi)似，亦被稱(chēng)為Western-blot.

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA)：是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。

免疫印跡法和斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)兩者的反應(yīng)原理不同。免疫印跡法(Westernblotting)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)；而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是雙抗體夾心法。因此兩者還是不同的。

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【問(wèn)題】Coombs試驗(yàn)的配血原理是什么？

凡Coombs試驗(yàn)即抗人球蛋白試驗(yàn)，是檢測(cè)血液中溫反應(yīng)性抗體的一種方法，也是診斷自身免疫性溶血性貧血的重要指標(biāo)。溫抗體中50%以上由IgG介導(dǎo)，其次為IgM，IgA和C3d等，因此本試驗(yàn)應(yīng)分選各種單克隆抗體同時(shí)測(cè)定。Coombs試驗(yàn)分為直接試驗(yàn)（直接反應(yīng)）和間接試驗(yàn)（間接反應(yīng)）：直接試驗(yàn)的目的是檢查紅細(xì)胞表面的不完全抗體；間接試驗(yàn)的目的是檢查血清中存在游離的不完全抗體。

（1）直接coombs試驗(yàn)用于檢測(cè)已粘附在紅細(xì)胞表面的不完全抗體。即將受檢紅細(xì)胞充分洗滌后，將抗球蛋白試劑加入已結(jié)合有抗體的受檢紅細(xì)胞懸液中，即可見(jiàn)細(xì)胞凝集?？捎貌Ｆㄗ龆ㄐ栽囼?yàn)，也可用試管法或微量法做半定量測(cè)定。用于檢測(cè)新生兒溶血癥、自身免疫性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等。

（2）間接coombs試驗(yàn)用于檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體。即將待測(cè)血清標(biāo)本加入具有特異抗原的紅細(xì)胞懸液中，如果抗原抗體相應(yīng)則發(fā)生結(jié)合，再加入抗球蛋白抗體，則出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。本法多用于檢測(cè)母體Rh（D）抗體以及因紅細(xì)胞不相容的輸血而產(chǎn)生的血型抗體。此外也可用專(zhuān)一特異性的抗球蛋白血清，如抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗補(bǔ)體血清等，分析與紅細(xì)胞表面結(jié)合的不完全抗體的Ig亞類(lèi)。

【問(wèn)題】?jī)?nèi)源性溶血形成的復(fù)合物是FIXa還是FXIa？

凝血因子特性凝血因子目前包括14個(gè)，除FⅢ存在于全身組織中，其余均存在于血漿中。

根據(jù)理化性質(zhì)分為四組。

（1）依賴(lài)維生素K凝血因子

包括FⅡ、FⅦ、FⅨ和FⅩ，其共同特點(diǎn)是在各自分子結(jié)構(gòu)的氨基末端含有數(shù)量不等的γ-羧基谷氨酸殘基，在肝臟合成中必須依賴(lài)維生素K。依賴(lài)維生素K凝血因子（依K因子）通過(guò)γ-羧基谷氨酸與Ca2＋結(jié)合，再與磷脂結(jié)合，這是依K因子參與凝血反應(yīng)的基礎(chǔ)。

（2）接觸凝血因子

包括經(jīng)典FⅫ、FⅪ和激肽系統(tǒng)的激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）。它們的共同特點(diǎn)是通過(guò)接觸反應(yīng)啟動(dòng)內(nèi)源凝血途徑，并與激肽、纖溶和補(bǔ)體等系統(tǒng)相聯(lián)系。

（3）對(duì)凝血酶敏感的凝血因子：

包括FⅠ、FⅤ、FⅧ和FⅩⅢ，它們的共同特點(diǎn)是對(duì)凝血酶敏感。

（4）其他因子

包括FⅢ、FⅣ。正常情況下，F(xiàn)Ⅲ不存在于血液中。FⅣ即Ca2＋。凝血機(jī)制

凝血過(guò)程示意圖

內(nèi)源凝血途徑

內(nèi)源凝血途徑（intrinsicpathway）是指由FⅫ被激活到FⅨa-Ⅷa-Ca2＋-PF3復(fù)合物形成的過(guò)程。

外源凝血途徑

外源凝血途徑（extrinsicpathway）是指從TF釋放到TF-FⅦa-Ca2＋復(fù)合物形成的過(guò)程。

共同凝血途徑。

【臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)】

免疫學(xué)技術(shù)中的親和層析法，利用抗原抗體反應(yīng)哪個(gè)特點(diǎn)來(lái)純化抗原或抗體

A．比例性

B．特異性

C．可逆性

D．親和力

E．疏水作用力

【正確答案】C

學(xué)員提問(wèn)：答案是D吧。

解析：可逆性：可逆性指抗原抗體結(jié)合后形成的，復(fù)合物在一定條件下可發(fā)生解離，恢復(fù)抗原抗體的游離狀態(tài)。抗原抗體結(jié)合是分子表面的結(jié)合，猶如酶與底物的結(jié)合，是一種非共價(jià)鍵結(jié)合，結(jié)合雖穩(wěn)定但可逆；抗原抗體的結(jié)合是一種動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，抗原抗體復(fù)合物的解離取決于抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親和力及反應(yīng)條件（如離子強(qiáng)度、pH等）。免疫學(xué)技術(shù)中的親和層析法就是利用這個(gè)原理來(lái)純化抗原或抗體。因此答案為C。

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【臨床微生物學(xué)】

有關(guān)莢膜描述錯(cuò)誤的是

A.具有免疫原性，可用于鑒別細(xì)菌

B.—般在機(jī)體內(nèi)形成

C.具有抗吞噬作用

D.可增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)熱的抵抗力

E.化學(xué)成分可以是多糖，也可以是多肽等

【正確答案】D

學(xué)員提問(wèn)：細(xì)菌夾膜一般是在機(jī)體內(nèi)形成嗎？不是某些細(xì)菌原來(lái)就存在的？

解答：細(xì)菌一般在機(jī)體內(nèi)和營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中才能形成莢膜。有莢膜的細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上形成光滑型（s型）或粘液型（m）菌落，失去莢膜后菌落變?yōu)榇植谛停╮）。莢膜并非細(xì)菌生存所必需，如莢膜丟失，細(xì)菌仍可存活。莢膜除對(duì)鑒別細(xì)菌有幫助外，還能保護(hù)細(xì)菌免遭吞噬細(xì)胞的吞噬和消化作用，因而與細(xì)菌的毒力有關(guān)。莢膜抗吞噬的機(jī)理還不十分清楚，可能由于莢膜粘液層比較光滑，不易被吞噬細(xì)胞捕捉之故。莢膜能貯留水分使細(xì)菌能抗干燥，并對(duì)其他因子（如溶菌酶、補(bǔ)體、抗體、抗菌藥物等）的侵害有一定抵抗力。

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【臨床血液學(xué)檢驗(yàn)】

急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞一般檢測(cè)不到下列哪種融合基因

A．PML-RARα

B．PLEF-RARα

C．Bcr/abl

D．NPM-RARα

E．以上融合基因都檢測(cè)不到

【正確答案】C

學(xué)員提問(wèn)：請(qǐng)解釋一下。

解答:慢性髓細(xì)胞性白血病(chronicmyeloidleukemia，CML)細(xì)胞有t(9；22)(q34；q11)易位形成的費(fèi)城染色體(Phchromosome)和BCR/ABL融合基因，它們?cè)谘翰⊙芯恐姓加兄匾匚?。在發(fā)現(xiàn)Ph染色體后的30多年里，臨床廣泛用細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢測(cè)Ph染色體做CML的診斷和療效監(jiān)測(cè)。尤其近十余年，分子生物學(xué)方法檢測(cè)BCR/ABL融合基因的應(yīng)用逐漸普及。因此急性早幼粒細(xì)胞一般檢測(cè)不到Bcr/abl。

因此答案為C。祝您順利通過(guò)考試！

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