生物素(biotin,B)廣泛分布于動(dòng)、植物組織中,常從含量較高的卵黃和肝組織中提取,分子量244.31kD.
一、活化生物素
利用生物素的羧基加以化學(xué)修飾可制成各種活性基團(tuán)的衍生物,稱為活化生物素。生物素活化后,可容易地與各種抗原、抗體、酶及核酸分子中相應(yīng)基團(tuán)偶聯(lián)形成生物素化標(biāo)志物。幾種常用于標(biāo)記不同類型生物大分子的活化生物素的制備及特性。
(一)標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基的活化生物素
(二)標(biāo)記蛋白質(zhì)醛基的活化生物素用于此類標(biāo)記的活化生物素有兩種:生物素酰肼(BHZ)和肼化生物胞素(BGHZ)。
(三)標(biāo)記蛋白質(zhì)巰基的活化生物素
3-(N-馬來酰亞胺-丙酰)-生物胞素(MPB)是能特異地與蛋白質(zhì)巰基結(jié)合的活化生物素試劑。
(四)標(biāo)記核酸的活化生物素
活化生物素可通過缺口移位法、化學(xué)偶聯(lián)法、光化學(xué)法及末端標(biāo)記法等技術(shù)使生物素的戊酸側(cè)鏈通過酰胺鍵與核酸分子相連,構(gòu)成生物素標(biāo)記的核酸探針。常用于標(biāo)記核酸分子的活化生物素有以下幾種:
1.光敏生物素它是一種化學(xué)合成的生物素衍生物,用于DNA或RNA的標(biāo)記醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
2.生物素脫氧核苷三磷酸先將生物素與某種脫氧核苷酸連接成活化生物素??刹捎萌笨谝莆环〒饺氲诫p鏈DNA中。
3.BNHS和BHZ二者均可以在一定條件下與核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交聯(lián),使核酸分子生物素化。
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